分光光度計是采用一個可以產生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產生特定波長的光源,光線透過測試的樣品后,部分光線被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉化成樣品的濃度。分光光度計已經成為現代分子生物實驗室常規儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。我們知道如何使用分光光度計的步驟嗎?
預熱儀器:為使測定穩定,將電源開關打開,使儀器預熱20min,為了防止光電管疲勞,不要連續光照。預熱儀器時和在不測定時應將比色皿暗箱蓋打開,使光路切斷。
選定波長:根據實驗要求,轉動波長調節器,使指針指示所需要的單色光波長。
固定靈敏度檔:根據有色溶液對光的吸收情況,為使吸光度讀數為0.2~0.7,選擇合適的靈敏度。為此,旋動靈敏度檔,使其固定于某一檔,在實驗過程中不再變動。一般測量固定在“1”檔。
調節“0”點:輕輕旋動調“0”電位器,使讀數表頭指針恰好位于透光度為“0”處(此時,比色皿暗箱蓋是打開的,光路被切斷,光電管不受光照)。
調節T=100%:將盛蒸餾水(或空白溶液或純溶劑)的比色皿放入比色皿座架中的格內,有色溶液放在其它格內,把比色皿暗箱蓋子輕輕蓋上,轉動光量調節器,使透光度T=100%,即,表頭指針恰好指在T=100%處。
測定:輕輕拉動比色皿座架拉桿,使有色溶液進入光路,此時表頭指針所示為該有色溶液的吸光度A,讀數后,打開比色皿暗箱蓋。
關機:實驗完畢,切斷電源,將比色皿取出洗凈,并將比色皿座架及暗箱用軟紙擦凈。